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流式細胞術(shù)助力T細胞淋巴瘤診療新突破!TRBC1/2應(yīng)用解析

流式細胞術(shù)進行T細胞淋巴瘤的檢測一直存在困擾,如其高度異質(zhì)性導致缺乏像B細胞淋巴瘤那樣明確的單克隆性判定標準,診斷主要依賴識別異常免疫表型,這在實際操作中面臨諸多挑戰(zhàn)?,F(xiàn)在隨著TRBC1/TRBC2的面世,通過流式細胞術(shù)進行細胞TCR是否存在限制性,可以檢測T淋巴瘤等疾病的細胞單克隆性,一定程度上改善了T淋巴瘤的困擾。
隨著TRBC1/TRBC2的深入應(yīng)用,有不少人還有一些困惑:
TRBC1/TRBC2在T細胞克隆性評估中的作用是什么?
如何應(yīng)用?
表達出現(xiàn)異常如何解讀?
小編圍繞大家的這些困惑,一起來展開探討。


TCR是T細胞表面的特征性標志,根據(jù)TCR組成鏈的不同,可將T細胞分為αβ T細胞和γδ T細胞,其中αβ T細胞約占T細胞的95%~99%,γδ T細胞約占1%~5%。由于αβ T細胞占T細胞的絕大多數(shù)且重排率更高,目前流式主要通過對αβ T細胞的TCR的克隆分布檢測來評估T細胞克隆性,主要有兩種方案:TCR-Vβ受體庫檢測(檢測TCR β鏈可變區(qū) (TCR-Vβ) 受體的多樣性)以及TRBC1/TRBC2檢測(檢測TCR β鏈恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的抗體)。
在TCR基因重排過程中,T細胞受體的β亞基恒定區(qū) (TRBC) 僅有兩種多態(tài)性,即TRBC1或TRBC2,每個TCR以隨機和互斥的方式不可逆地選擇兩個恒定區(qū)域中的一個進行表達,類似于B細胞κ和λ,為多克隆表達。與TCR-Vβ受體庫相比,TRBC1/TRBC2檢測是流式細胞評估T細胞克隆性更簡單且更優(yōu)的方法,當某一TRBC群體的表達比例大于85%或小于15%時,則提示單克隆性表達。



初始篩選:
使用TRBC1/TRBC2分析作為初始篩查工具,評估T細胞克隆性。建議使用15%和85%作為統(tǒng)一的截斷值。
附加panel:
通過評估T細胞骨架抗原表達來識別異常群體,然后再使用TRBC1/TRBC2評估克隆性。

T淋巴瘤篩查路徑圖


是否有TRBC1/2雙染色必要性?
有文獻數(shù)據(jù)表明,69%的TRBC1(dim)病例為TRBC2陽性,因此TRBC1/2雙染色在TRBC1(dim)病例中很有必要,以判斷異常人群表達的是TRBC2還是下調(diào)的TRBC1。
什么時候做細胞內(nèi)TRBC1/TRBC2的檢測?
對于表面CD3陰性的TRBC1/TRBC2細胞腫瘤,評估細胞內(nèi)TRBC1/TRBC2很有價值。建議使用與表面染色相同的抗體組合,并在破膜后添加TRBC1/TRBC2。
相當比例的T細胞腫瘤表面不表達CD3,鑒于CD3和TRBC1/2的表達是相關(guān)的,且兩者都是T細胞受體復合物的組成部分,而CD3陰性的成熟T細胞本身就是異常的,無需進行表面TRBC1/2。這時,可使用細胞內(nèi)CD3和TRBC1/2進行克隆性評估。部分胞內(nèi)TRBC2細胞可能表現(xiàn)出非常微弱的表達,與內(nèi)部陰性對照細胞重疊,這個時候結(jié)果的解讀尤需注意。
一項研究顯示,在表面CD3陰性的T細胞中使用胞內(nèi)CD3、TRBC1和TRBC2可以在大多數(shù)病例中得出結(jié)論;其中有13%的成熟T細胞淋巴瘤沒有表達胞內(nèi)TRBC1或TRBC2,包括部分T-PLL、PTCL、EBV陽性T細胞淋巴瘤及嗜酸性粒細胞增多綜合征的淋巴細胞變異型等。
有沒有TRBC1/TRBC2均不表達的情況?
早期T細胞前體型T-ALL(ETP T-ALL)在胞質(zhì)TRBC1和TRBC2中均為陰性,其診斷主要依賴于顯示CD8和CD1a缺失、CD5微弱/陰性表達,以及表達未成熟和髓系標志物如CD11b、CD13、CD33、CD65、CD117、CD34或HLA-DR。因此T-ALL通常不需要常規(guī)評估TRBC1/TRBC2,更成熟的病例可能顯示胞內(nèi)TRBC1/TRBC2受限。
是否有出現(xiàn)TRBC1/TRBC2雙表達情況?
迄今尚無TRBC1/TRBC2雙表達的惡性病例;如出現(xiàn)這雙表達情況,需要確認是否存在試劑加樣出現(xiàn)錯誤或污染、或電壓補償條件是否合適等。
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希望這篇文章能幫助大家更好地理解流式細胞術(shù)在T細胞淋巴瘤檢測中的應(yīng)用,尤其是TRBC1/TRBC2的應(yīng)用和解讀。如果你對這個話題感興趣,歡迎留言討論!
參考文獻(上下滑動閱覽)

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