CytoFLEX nano精準量化負載效率，為神經(jīng)退行性疾病治療提供關鍵證據(jù)

—— 貝克曼庫爾特（Beckman?Coulter）CytoFLEX nano 在工程化細胞外囊泡負載效率分析中的應用

CytoFLEX nano 納米流式分析平臺由貝克曼庫爾特（Beckman?Coulter）推出，適用于納米級小顆粒及細胞外囊泡樣本的流式分析。本研究中，該平臺被用于細胞外囊泡負載效率的定量評估。

研究背景

帕金森?。?/span>PD）是全球第二大神經(jīng)退行性疾病，其主要病理特征包括多巴胺能神經(jīng)元丟失、α?突觸核蛋白（α?Syn）異常聚集、溶酶體功能障礙以及線粒體損傷。姜黃素具有一定的神經(jīng)保護潛力，但受限于生物利用度低、體內(nèi)清除快以及血腦屏障穿透能力有限，其臨床應用受到明顯制約。

因此，如何實現(xiàn)姜黃素在腦內(nèi)，尤其是多巴胺能神經(jīng)元中的有效遞送，是當前帕金森病相關研究中的關鍵科學問題。

研究創(chuàng)新：工程化靶向細胞外囊泡遞送系統(tǒng)

中國醫(yī)科大學等機構的研究團隊構建了一種基于工程化細胞外囊泡（extracellular vesicles, EVs）的靶向遞送系統(tǒng)。研究人員通過對 HEK293T 細胞進行基因工程改造，使其分泌的 EV 表面表達靶向多巴胺轉(zhuǎn)運體（DAT）的單鏈抗體片段（scFv），從而賦予 EV 對多巴胺能神經(jīng)元的靶向能力。

在此基礎上，研究團隊將姜黃素負載至上述靶向 EV 中，構建了 Cur@αDAT EVs 遞送體系。相關研究成果發(fā)表于 Journal of Nanobiotechnology。

圖1｜工程化 Cur@αDAT EVs 的構建思路及其在帕金森病研究中的應用示意

CytoFLEX nano：用于EV負載效率定量分析的工具（貝克曼庫爾特 Beckman?Coulter）

在對該遞送系統(tǒng)進行表征時，研究團隊需要回答一個關鍵問題：在制備得到的 EV 群體中，有多少 EV 實際成功負載了姜黃素？

為此，研究人員采用了貝克曼庫爾特（Beckman?Coulter）CytoFLEX nano 納米流式分析儀對 EV 樣本進行分析。通過對熒光信號進行定量統(tǒng)計，研究團隊得以評估姜黃素在 αDAT EVs 中的負載比例。

CytoFLEX nano 的分析結(jié)果顯示，約 88.3% 的 αDAT EVs 成功負載了姜黃素（圖2F）。該結(jié)果為后續(xù)體內(nèi)外功能實驗提供了明確的定量基礎。

圖2｜αDAT?EV 的表征及負載效率分析（其中 F 為基于貝克曼庫爾特 CytoFLEX nano 的納米流式分析結(jié)果）
（A）αDAT scFv?CD63 融合構建體示意
（B）SPR 分析 αDAT?EV 與重組人 DAT 蛋白的結(jié)合
（C）Western blot 分析 EV 標志物
（D–E）姜黃素包封與包封效率分析
（F）CytoFLEX nano 對負載姜黃素 EV 的定量分析
（G–J）熒光顯微、TEM 及 NTA 分析結(jié)果

技術說明｜貝克曼庫爾特（Beckman?Coulter）CytoFLEX nano

CytoFLEX nano 是一款納米級流式細胞分析系統(tǒng)，可用于對小顆粒樣本進行多參數(shù)檢測。在本研究中，該平臺被用于區(qū)分并定量分析負載與未負載姜黃素的細胞外囊泡群體。

研究核心發(fā)現(xiàn)

01 體外神經(jīng)保護作用

在 6?羥基多巴胺（6?OHDA）誘導的帕金森病細胞模型中，Cur@αDAT EVs 處理可降低活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）水平，減少 α?Syn 聚集，并上調(diào) PARKIN、TH 和 DJ?1 等相關蛋白的表達。

02 自噬?溶酶體通路調(diào)控

Cur@αDAT EVs 處理可抑制 AKT?mTOR 信號通路，促進轉(zhuǎn)錄因子 EB（TFEB）核轉(zhuǎn)位，從而增強自噬?溶酶體通路功能。實驗中觀察到具有酸性溶酶體的細胞比例明顯上升。

03 線粒體功能改善

處理后細胞的線粒體含量與膜電位增加，并伴隨線粒體轉(zhuǎn)錄因子 A（TFAM）表達上調(diào)，提示線粒體功能得到改善。

04 體內(nèi)分布及行為學變化

在 6?OHDA 誘導的帕金森病大鼠模型中，αDAT EVs 在腦組織中呈現(xiàn)較高富集，并在一定時間內(nèi)保持可檢測水平。Cur@αDAT EVs 處理后，大鼠的部分運動與行為學指標得到改善

圖3｜Cur@αDAT EVs 在 PD 大鼠模型中的體內(nèi)分布及行為學評估結(jié)果

05 神經(jīng)免疫微環(huán)境調(diào)節(jié)

Cur@αDAT EVs 處理促進小膠質(zhì)細胞表型變化，并影響星形膠質(zhì)細胞狀態(tài)，同時提高多種神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達水平。

圖4｜Cur@αDAT EVs 在 PD 模型中的組織學與免疫學評估結(jié)果

結(jié)論

本研究成功開發(fā)了一種基于工程化細胞外囊泡的靶向遞送系統(tǒng)，通過表面展示抗DAT單鏈抗體，實現(xiàn)了姜黃素向多巴胺能神經(jīng)元的精準遞送。Cur@αDAT EVs通過激活自噬-溶酶體通路、改善線粒體功能、調(diào)節(jié)神經(jīng)免疫微環(huán)境，在帕金森病細胞和動物模型中展現(xiàn)出顯著的治療效果。

研究過程中，貝克曼庫爾特（Beckman?Coulter）CytoFLEX nano 納米流式分析平臺對研究中EV負載效率的精準量化，結(jié)合對線粒體功能、免疫細胞極化的系統(tǒng)分析，先進的分析工具貫穿了整個研究的證據(jù)鏈，為這一創(chuàng)新治療策略的可靠性提供了堅實支撐。本研究不僅為帕金森病治療提供了新策略，也為難溶性藥物的靶向遞送提供了可借鑒的方法學參考。

平臺信息｜貝克曼庫爾特（Beckman?Coulter）CytoFLEX nano

Ø       清晰分辨40nm-1μm粒徑的小顆粒樣本

Ø       配備4激光12通道，全方位滿足實驗設計靈活性需求

Ø       內(nèi)置靈敏度監(jiān)測，樣品體積監(jiān)測和Baseline監(jiān)控，確保實驗數(shù)據(jù)的準確性、可靠性和可重復性

參考文獻
Shie, M.Y., Chen, M.C., Chen, Y. et?al. Engineered extracellular vesicles?mediated curcumin delivery in brain microenvironment modulating lysosomes, mitochondria, and microglia reprogram for parkinson’s disease therapy. J Nanobiotechnol 24, 46 (2026).

#神經(jīng)退行性#帕金森#納米流式分析儀#CytoFLEX nano